土壤微生物的物种丰富度是怎么测出来的？

测定土壤微生物物种丰富度通常采用分子生物学技术，如PCR-DGGE（聚合酶链反应-变性梯度凝胶电泳）、PCR-TGGE（聚合酶链反应-温度梯度凝胶电泳）和PCR-RFLP（聚合酶链反应-限制性片段长度多态性）等。 具体操作步骤如下： 1.采集土样：通常采用不同深度、不同生长季节和不同种植作物地点的土样。样品应随机采集，避免重复采集同一地点的土样。 2.提取土壤DNA：将采集的土样通过不同的DNA提取方法提取土壤中的总DNA。 3.PCR扩增：使用通用引物（如16S rRNA基因对细菌的引物，18S rRNA基因对真菌的引物）扩增所需要的基因片段。 4.电泳分离：将PCR产物通过含有变性梯度或温度梯度的凝胶电泳进行分离。通常通过DGGE或TGGE来检测产物的物种多样性，也可以使用RFLP等。 5.图谱分析：用所得的指纹图谱进行分析，识别出样品中的微生物物种和数量。可以采用聚类分析或PCA分析等方法分析数据。 6.物种丰富度计算：根据PCR-DGGE或PCR-TGGE电泳图上的 PCR产物数量和强度，计算物种丰富度的各项指标，如Shannon-Weaver指数、Simpson指数、Pielou的均匀度指数等。 总体来说，采用 PCR-DGGE或PCR-TGGE技术能够较准确的测定土壤微生物物种的丰富度。

总结

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